Получение специфических компонентов бактерий Clostridium perfringens для иммуноферментного анализа

В статье представлены методы получения специфических компонентов бактерий Clostridium perfringens и гипериммунной сыворотки для иммуноферментного анализа. Антиген получили методом озвучивания суспензии бактерий Cl. perfringens, содержащей в 1 см3 по 5 млрд. м.к. бактерий серотипов А, В, С, Д, на ультразвуковом дезинтеграторе с частотой 20 мГц в течение 10-15 минут при 40С с последующим осаждением эндотоксина сульфатом аммония и диализом против водопроводной воды. Положительную сыворотку получили путем гипериммунизации молодняка крупного рогатого скота корпускулярным антигеном и анатоксином бактерий Cl. perfringens серотипов А, В, С и Д. Гипериммунизацию животных проводили 4-х кратно с интервалом 14 дней. При этом животным вводили одновременно корпускулярный антиген подкожно и анатоксин - внутримышечно. Провели стандартизацию основных условий проведения реакции ИФА: определение оптимальной концентрации и времени адсорбции антигена на полистироловый планшет, подбор времени экспозиции исследуемых сывороток. Наиболее приемлемый показатель титра сывороток крови животных выявили при разведении конъюгата 1:2500 и концентрации сорбированного антигена 5-8 мкг/см3. Установили, что эффективно использовать режим иммобилизации антигена в течение 18 часов при температуре 40С. Межлабораторное комиссионное испытание показало, что все компоненты тест-системы активны и специфичны. Специфический антиген не реагирует с гетерогенными гипериммунными сыворотками (сальмонеллезной, эшерихиозной), тогда как с гомологичными сыворотками (гипериммунной и сыворотками крови от вакцинированных и больных анаэробной энтеротоксемией животных) дают положительную реакцию в высоких титрах - 1:3200 - 1:12800